國家食品藥品監督管理局

關于印發化妝品中禁用物質和限用物質檢測方法驗證技術規范的通知

國食藥監許[2010]455號


各省、自治區、直轄市食品藥品監督管理局（藥品監督管理局）：

　　為規范化妝品檢測方法的驗證程序，《化妝品中禁用物質和限用物質檢測方法驗證技術規范》已經國家食品藥品監督管理局化妝品標準專家委員會審議通過，現予印發。


　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　國家食品藥品監督管理局
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 二○一○年十一月二十九日




化妝品中禁用物質和限用物質檢測方法
驗證技術規范

為加強對化妝品中禁用物質和限用物質檢測方法研究工作的技術指導，規范化妝品中禁用物質和限用物質檢測方法研究和驗證工作，明確檢測方法驗證內容和評價標準，有效保證研究制定的檢測方法具備先進性和可行性，特制定本規范。
1 適用范圍
本規范規定了化妝品中禁用物質和限用物質檢測方法研究和建立過程中檢測方法驗證內容、技術要求和評價指標。
本規范適用于化妝品中禁用物質和限用物質檢測方法的驗證與評價。
2 依據
《化妝品衛生規范》
3 釋義
3.1 本規范中所指化妝品中禁用物質是指《化妝品衛生規范》中規定的化妝品禁用組分。
3.2 本規范中所指化妝品中限用物質是指《化妝品衛生規范》中規定的化妝品組分中限用物質、限用防曬劑、限用防腐劑、限用著色劑、暫時允許使用的染發劑等。
4 定義與術語
4.1 被測物質
是指本規范第3項規定的禁用物質和限用物質。
4.2特異性
在確定的分析條件下，檢測方法所具備的檢測和區分共存組分中被測物能力的特性。
4.3 線性及線性范圍
4.3.1 線性
是指在設計范圍內檢測響應值與樣品中被測物質濃度或量成比例關系的程度。
4.3.2 線性范圍
是指利用一種方法取得精密度、準確度均符合要求的檢測結果，而且呈線性的被測物質濃度或量的變化范圍。
4.4檢出限和定量下限
4.4.1 檢出限：被測物質能被檢測出的最低量。
4.4.2 定量下限：能夠對被測物質準確定量的最低濃度或質量。
4.5 檢出濃度和最低定量濃度
4.5.1檢出濃度：按照檢測方法操作，方法檢出限對應的被測物質濃度。
4.5.2最低定量濃度：按照檢測方法操作，定量下限對應的被測物質濃度。
4.6 精密度
在確定的分析條件下，相同濃度被測物質的一系列獨立測量結果的一致程度，包括日內精密度和日間精密度。
日內精密度：同一天測定的精密度。
日間精密度：不同天測定的精密度。
4.7回收率
提取回收率：是指在確定的分析條件下，回收到物質的實際濃度的百分比，以樣品提取和處理過程前后被測物質含量百分比表示。
方法回收率：是指在確定的分析條件下，被測物質測得值與真實值的接近程度，以百分比表示。
4.8 實驗樣品
為建立和驗證檢測方法而使用的化妝品。
4.9 空白樣品
能夠以可重復方式獲得或制備的，不含被測物質的化妝品。
4.10 穩定性
在確定的分析條件下，一定時間內被測物質在一定溶劑或空白樣品中的化學穩定性，包括日內穩定性和日間穩定性。
日內穩定性：在一定溶劑或空白樣品中的被測物質在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下放置一天的穩定性。
日間穩定性：在一定溶劑或空白樣品中的被測物質在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下放置多天的穩定性。
5 檢測方法驗證的內容
方法驗證包括實驗室內驗證和實驗室間驗證。
實驗室內驗證的內容一般包括：方法特異性、線性及線性范圍、檢出限和定量下限、檢出濃度和最低定量濃度、精密度、準確度、回收率和實驗樣品檢測。
實驗室間驗證的內容一般包括：方法特異性、線性及線性范圍、檢出限、最低定量濃度、日內精密度、回收率和實驗樣品檢測。
6 檢測方法驗證的技術要求
6.1 實驗室內方法驗證
6.1.1特異性
所采用的檢測方法需要克服任何可預見的干擾，特別是來自實驗樣品中除被測物質以外的其他組分的干擾，一般對具有代表性的空白樣品和空白樣品加被測物質的樣品，按照確定的樣品前處理方法處理后，進樣檢測分析，考察實驗樣品中除被測物質以外的其他組分對被測物質的測定有無干擾。
6.1.2 線性及線性范圍
線性考察：制備至少5個系列濃度（不包括零點）的被測物質標準品溶液，進行檢測分析，記錄相應的信號響應值，以被測物質標準品溶液的濃度為橫坐標（x）、信號響應值為縱坐標（y）建立標準曲線，進行相關性分析，并回歸得到線性方程和相關系數（r）。呈線性的被測物質的濃度或量的變化范圍確定為線性范圍。
方法線性考察：在空白樣品中加入被測物質標準品，制備成至少5個系列濃度（不包括零點）的樣品溶液，進行檢測分析，記錄相應的信號響應值，以被測物質的濃度為橫坐標（x）、信號響應值為縱坐標（y）建立方法標準曲線，進行相關性分析，并回歸得到線性方程和相關系數（r）。呈線性的被測物質濃度的變化范圍確定為線性范圍。
必要時，信號響應值可進行數學轉換，再進行回歸計算。
6.1.3 檢出限和定量下限
檢出限和定量下限考察見《化妝品衛生規范》。
6.1.4 檢出濃度和最低定量濃度
按照檢測方法操作，能夠從實驗樣品背景中區分出被測物質響應信號的最低濃度為檢出濃度，能夠對實驗樣品背景中被測物質進行準確定量的最低濃度或質量為最低定量濃度。
6.1.5 精密度
6.1.5.1日內精密度
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質或在空白樣品中加入被測物質的標準溶液，其中：高濃度的標準溶液應接近標準曲線或方法標準曲線的最高點（下同）；低濃度的標準溶液應接近最低定量濃度（下同），于同一日內測定至少6次，記錄被測物質的信號響應值，考察該組測量值的彼此符合程度，以相對標準偏差（RSD）表示。
6.1.5.2日間精密度
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質或在空白樣品中加入被測物質的標準溶液，于不同日測定，記錄被測物質的信號響應值，考察該組測量值的彼此符合程度，以相對標準偏差（RSD）表示。
6.1.5.3相對標準偏差（RSD）的計算
， 其中：
6.1.6 回收率
6.1.6.1提取回收率
采用在空白樣品或實驗樣品中添加高低兩種濃度被測物質標準品的方法測定，記錄被測物質的信號響應值，代入標準曲線計算被測物質的濃度，計算提取回收率。
6.1.6.2方法回收率
采用在空白樣品或實驗樣品中添加高低兩種濃度被測物質標準品的方法測定，記錄被測物質的信號響應值，代入方法標準曲線計算被測物質的濃度，計算方法回收率。
6.1.6.3回收率的計算公式
回收率= （樣品中被測物質的測定量－樣品中被測物質的原有量）/實際添加量×100%
6.1.7 穩定性
6.1.7.1日內穩定性
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質或在空白樣品中加入被測物質的標準溶液，在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下，在不同時間點分別測定，代入標準曲線或方法標準曲線計算被測物質的濃度，并計算其準確度和RSD值，考察被測物質在溶液或空白樣品中放置一天內的穩定性。
6.1.7.2日間穩定性
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質或在空白樣品中加入被測物質的標準溶液，在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下，連續多天測定，代入標準曲線或方法標準曲線計算被測物質的濃度，并計算其準確度和RSD值，考察被測物質在溶液或空白樣品中放置多天的穩定性。
6.1.8 實驗樣品檢測分析
選擇具有代表性的實驗樣品，按照《化妝品衛生規范》規定取樣，嚴格按照檢測方法進行檢測分析。
6.1.9 禁用物質陽性結果判定依據考察
化妝品中禁用物質陽性結果必須采用適宜的、可靠的方法進行確證。采用色譜-質譜技術確證化妝品中禁用物質陽性結果時，按照確定的分析條件，考察實驗樣品與加入被測禁用物質的空白樣品的質量色譜峰保留時間以及濃度相當時的定性離子的相對豐度比的一致性。采用其他技術確證化妝品中禁用物質陽性結果時，應建立能夠保證確證結果正確性的依據和評價指標。
6.2 實驗室間方法驗證
6.2.1 參加檢測方法驗證的機構或實驗室
參加檢測方法驗證的機構或實驗室必須是按照國家有關認證認可的規定，取得資質認定，其檢測人員、環境條件、設施設備等應滿足檢測方法驗證的要求。每種檢測方法參加方法驗證的檢測機構或實驗室應不少于3家。
6.2.2 方法驗證樣品的提供
方法建立機構或實驗室應向參與方法驗證的機構或實驗室提供一致的實驗樣品、空白樣品和標準品，并應注意樣品的被測物質的本底情況。
6.2.3 方法驗證技術要求
實驗室間的具體驗證技術要求同6.1實驗室內方法驗證。
6.3方法驗證內容的評價指標
6.3.1特異性
實驗樣品中共存物質應對被測物質的測定結果無干擾。
6.3.2 線性及線性范圍
線性范圍適宜，能夠滿足化妝品中被測物質測定要求，且線性良好，線性相關系數≥0.99。
6.3.3 檢出限和定量下限
具有足夠低的檢出限和定量下限，能夠滿足化妝品中被測物質測定要求。
6.3.4 檢出濃度和最低定量濃度
具有足夠低的檢出濃度和最低定量濃度，能夠滿足化妝品中被測物質測定要求。通常要求方法最低定量濃度的精密度的相對標準偏差（RSD）應不超過20%，方法回收率要求在80%-120%之間。
6.3.5 精密度
根據化妝品中被測物質的含量及確定的分析方法，精密度應能夠滿足化妝品中被測物質的測定要求，通常日內和日間精密度的相對標準偏差（RSD）應不超過表1所列水平。特殊情況應予以說明。
表1：精密度的接受范圍
被 測 物 精密度RSD
含量 ≤10 µg / kg 20%
10 µg / kg ＜ 含量 ≤ 100 µg / kg 15%
100 µg / kg ＜ 含量 ≤ 1000 µg / kg 10%
含量 ＞1000 µg / kg 5%
6.3.6 回收率
根據化妝品中被測物質的含量及確定的分析方法，回收率應能夠滿足化妝品中被測物質的測定要求。通常提取回收率要求在85%-115%之間，如果提取回收率超出85%-115%的范圍，則要求方法回收率在85%-115%之間。特殊情況應予以說明。
6.3.7 穩定性
要求被測物質的標準溶液或前處理后的樣品在穩定時間內使用和測定。
6.3.8 實驗樣品分析結果
在重復條件下兩次獨立測定結果的標準偏差在已確定分析方法的精密度接受范圍內。
6.3.9 禁用物質陽性結果判定依據
采用色譜-質譜技術確證化妝品中禁用物質陽性結果時，實驗樣品與加入被測禁用物質的空白樣品的質量色譜峰保留時間要求一致，至少兩組濃度相當時的定性離子的相對豐度比一致，定性離子的相對豐度比的最大偏差應不超過表2的規定。采用其他技術確證化妝品中禁用物質陽性結果時，要求滿足陽性結果確證依據和評價指標。

表2：禁用物質陽性結果判定時相對離子豐度比的最大允許偏差

相對離子豐度比（k） k ≥50% 50 %> k ≥ 20 % 20 %> k ≥ 10 % k≤ 10 %
最大允許偏差 ±20% ±25% ±30% ±50%

6.3.10 實驗室間驗證結果的評價
實驗室間驗證結果應相符。